Schnelles biochemisches Reagens CER DNA-Verdauungs-5-15 Min Enzyme BsaI genehmigte

Enzyme BsaI

Enzyme sind Reihen ausgeführte Restriktionsenzyme für schnelle DNA-Verdauung in 5-15 min. Enzymen können verwendet werden, um die Plasmid-, genomische und Viren-DNA- sowie PCR-Produkte zu verdauen. Alle Enzyme zeigen überlegene Tätigkeit im Universalpuffer, also vereinfachten das enzymatische Verdauungsreaktionssystem. Außerdem liefert die Enzyme ausgezeichnete Enzymredundanz und erlaubt einfache Verdauung von überschüssigen oder schwierigen Schablonen des Substrates.

Verschiffen und Lagerung

Die Komponenten werden mit Eisbeutel versendet und können an -20°C für 2 Jahre gespeichert werden.

Nutzungsfläche

5' - GGTCTC (N)1↓-3 '

3' - CCAGAG (N)5↑-5 '

Empfohlene Reaktions-Zustände

Puffer 1× FuniCut™; Brüten Sie an 37℃ aus.

Thermische Inaktivierung

Ausbrütung an 80℃ für 20 Min.

Qualitätskontrolle

1. Tätigkeitsdefinition: 1 μg pPIC9K DNA wurde vollständig mit 1 μL des Enzyms in Minute 15 an 37℃ in einem Gesamtreaktionsvolumen μL 20 verdaut.

2. Verlängerte Ausbrütungs-/Stern-Tätigkeits-Probe: Keine nachweisbare Verminderung von 1 μg pPIC9K DNA wegen der Nukleaseverschmutzung oder der Sterntätigkeit trat während der Ausbrütung mit 1 μL FuniCut™ BsaI 3 Stunde lang an 37℃ auf. Längere Ausbrütung ergibt möglicherweise Sterntätigkeit.

3. Bindung und Recleavage (L/R) Probe: Nach verdaut mit Enzym 1μL unter der optimalen Bedingung, bereiten Sie Produkt von der Verdauung kann unter Ligase DNA-T4 an 22℃ verbunden werden auf. Das Bindungsprodukt kann durch das Enzym recleavaged.

4. Unspezifische Endonuclease-Tätigkeit: Ausbrütung von 1 μL Enzym mit 1 μg supercoiled Plasmid DNA 4 Stunden lang an 37℃ ergab keine Änderung der supercoiled Zustandes.

Anweisungen

1. Protokoll für schnelle Verdauung unterschiedlicher DNA

1,1 Mähdrescher, den die folgenden Reaktionskomponenten auf Eis im Auftrag anzeigten:

[Anmerkung]: *For gereinigte PCR-Produkte. Menge von Puffer 10× FuniCut™ wird verringert möglicherweise auf dem μL 2 wegen der restlichen Ionenstärke in den ungereinigten PCR-Produkten. Pcr-Produkt wurde empfohlen, um gereinigte frühere Verdauung zu sein, wenn PCR-Produkt für das Klonen benutzt wird.

1,2 Mischung leicht (nicht Turbulenz tun) und Drehbeschleunigung unten.

1,3 brüten Sie an 37℃ für Minute 15 (Plasmid DNA) oder für Minute 15-30 (PCR-Produkt) oder für Minute 30-60 aus (genomische DNA).

1,4 optional: Inaktivieren Sie das Enzym, indem Sie für Minute 20 an 80℃ erhitzen.

2. Doppelte und mehrfache Verdauung von DNA

2,1 benutzen Sie 1 μL jedes Enzyms und stufen Sie oben die Reaktionszustände passend ein.

2,2 sollte das kombinierte Volumen der Enzyme im Reaktionsgemisch 1/10 des Gesamtreaktionsvolumens nicht übersteigen.

2,3 wenn die Enzyme verschiedene Reaktionstemperaturen erfordern, addieren Anfang mit dem Enzym, das eine niedrigere Temperatur erfordert, dann das zweite Enzym und brüten bei der höheren Temperatur aus.

3. Gradeinteilung herauf Plasmid DNA-Verdauungs-Reaktion

[Anmerkung]: Ausbrütung in einem Wasserthermostat, im Metallthermostat oder im Sandthermostat. Erhöhen Sie die Inkubationszeit, wenn das Gesamtreaktionsvolumen μL 20 übersteigt.

Zahl von Anerkennungs-Standorten in DNA